紫外可見分光光度計UV-VIS是一種基于物質對紫外光或可見光區(qū)域的吸收特性，進行定性、定量分析的儀器。它通過測量樣品對特定波長光的吸收程度，來確定樣品中物質的濃度或結構信息，廣泛應用于化學、生物、醫(yī)藥、環(huán)境等領域。其工作原理主要依賴于物質對光的吸收特性。不同的物質因其分子、原子和分子空間結構的不同，其吸收光能量的情況也會有所差異。因此，每種物質都有其有的、固定的吸收光譜曲線。通過測量物質在特定波長下的吸光度，我們可以了解物質的成分、結構和物質間的相互作用。
一、儀器準備
開機預熱
接通電源，打開儀器開關，讓儀器預熱一段時間，一般需要15-30分鐘。這樣做是為了讓儀器內部的光學元件、電子元件等達到穩(wěn)定的工作狀態(tài)，確保測量的準確性和穩(wěn)定性。例如，在一些高精度的測量中，未預熱充分的儀器可能會出現波長校準偏差等問題。
波長校準（如有需要）
使用已知光譜特性的標準物質（如鈥濾光片）來檢查和校準波長。不同型號的儀器可能有不同的校準方法，但一般來說，需要將標準物質放入光路中，在儀器的軟件或控制面板上找到波長校準選項，按照提示操作，使儀器顯示的波長與標準物質的吸收峰波長相符。這一步驟對于保證測量波長的準確性至關重要，因為波長的微小偏差可能會導致測量結果的較大誤差。
二、樣品準備
選擇合適的吸收池
根據測量的波長范圍選擇玻璃或石英吸收池。一般來說，紫外光區(qū)（通常小于400nm）應使用石英吸收池，因為普通玻璃會吸收紫外光；可見光區(qū)可以使用玻璃吸收池。同時，要確保吸收池干凈、無劃痕，因為吸收池的透明度和均勻性會影響測量結果。
樣品溶液制備
將待測樣品溶解在合適的溶劑中，制備成適宜濃度的溶液。溶液濃度應在儀器的線性范圍內，即吸光度值在0.2-0.8之間比較合適。如果濃度過高，可能會導致吸光度超出線性范圍，使測量結果不準確；濃度過低，則可能會使測量信號較弱，增加測量誤差。同時，要注意溶劑的選擇，溶劑在測量波長范圍內應該沒有明顯的吸收，否則會干擾樣品的測量。
三、測量操作
設置測量參數
根據樣品的性質和測量要求，在儀器上設置測量模式（如吸光度模式、透過率模式等）、波長范圍、掃描速度等參數。例如，如果是進行定量分析，通常采用吸光度模式；如果是研究樣品的光譜特性，可能需要設置較寬的波長范圍和適當的掃描速度。
空白對照（參比）設置
選擇合適的空白溶液（如溶劑、不含待測物質的溶液等），將其放入吸收池中，置于光路中作為參比。儀器會根據參比溶液的吸光度或透過率來校正樣品測量中的背景信號。這一步可以消除溶劑、吸收池等因素對測量結果的影響，提高測量的準確性。
樣品測量
取出空白溶液吸收池，將制備好的樣品溶液吸收池放入光路中。然后按照儀器的操作指令進行測量，儀器會記錄樣品在不同波長下的吸光度或透過率數據。在測量過程中，要注意保持樣品池的位置準確，避免光線散射等情況影響測量結果。
四、數據處理與記錄
數據處理
根據測量得到的數據，利用儀器自帶的軟件或者外部數據處理軟件進行分析。例如，在定量分析中，可以使用朗伯-比爾定律來計算樣品的濃度；在定性分析中，可以通過比較樣品的光譜特征與標準光譜來確定樣品的成分。
記錄結果
將測量得到的數據、處理后的結果以及相關的實驗條件（如樣品名稱、濃度、測量波長等）詳細記錄下來。這樣可以方便后續(xù)的數據查詢、分析和報告撰寫。同時，對于重要的實驗數據，最好進行多次測量取平均值，以減少偶然誤差。
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