關(guān)于液相色譜柱使用中的

常見(jiàn)問(wèn)題解答

Question

采用純有機(jī)試劑（如甲醇、乙腈），從0.1mL/min流速慢慢提高到正常使用流速，沖洗總體積以20倍柱體積為宜，以便固定相能充分潤(rùn)濕、碳鏈?zhǔn)嬲归_(kāi)，使色譜柱的性能達(dá)到好狀態(tài)，并觀察壓力和基線狀態(tài)。

柱體積計(jì)算參照公式：

常見(jiàn)的色譜柱規(guī)格的柱體積計(jì)算如下：

正相色譜柱 (SIL, DIOL，CN，NH2）封存溶劑與質(zhì)控方法相關(guān)，不同的封存溶劑活化存在差異，以島津現(xiàn)有的色譜柱為例，具體活化方法如下：（可點(diǎn)擊預(yù)覽大圖）

不同方法如下：

采用HILIC模式對(duì)樣品進(jìn)行分離分析，一般用于分離大極性化合物，因此對(duì)于極性大、吸附太強(qiáng)的雜質(zhì)，常規(guī)清洗效果不明顯，可以加大水比例，增加洗脫強(qiáng)度，先用純水：乙腈=50:50，清洗20倍柱體積，然后梯度過(guò)渡到95%乙腈清洗，并保存在該流動(dòng)相中。

當(dāng)流動(dòng)相中使用了時(shí)間長(zhǎng)，且緩沖鹽使用較多；或者等度高比例水相一段時(shí)間造成了柱頭嚴(yán)重污染，常規(guī)的沖洗難以達(dá)到一個(gè)好的效果，此時(shí)可以進(jìn)行反沖。

除非特殊情況，一般選擇填料基質(zhì)與分析柱基質(zhì)相同的保護(hù)柱保護(hù)柱，確保，確保分離選擇性一致；規(guī)格選擇方面，盡量選擇粒徑一致或者相近的保護(hù)柱，且耐壓符合要求，保護(hù)柱體積按分析柱體積的5%~10%，保護(hù)柱內(nèi)徑應(yīng)與分析柱內(nèi)徑相同或相當(dāng)。

保護(hù)柱的再生一般采用，取下保護(hù)柱，在不打開(kāi)卡套的前提下將保護(hù)柱反接（注意此時(shí)不能接色譜柱），用10%甲醇水沖洗  30min，然后再用純甲醇沖洗30min。

四氫呋喃（THF）在反相色譜中，洗脫能力比甲醇和乙腈要強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在流動(dòng)相中加入THF能改善某些難分離的物質(zhì)的分離度及峰形。

但是THF也存在不穩(wěn)定，易降解生成過(guò)氧化物，從而導(dǎo)致峰形拖尾、峰分裂以及鬼峰；同時(shí)過(guò)氧化物還可與填料發(fā)生化學(xué)作用，一定程度上，THF會(huì)對(duì)柱子造成損傷，而且這種損傷隨著時(shí)間而累積；再者THF對(duì)PEEK有腐蝕作用，因此添加濃度一般不超過(guò)20%。

1. 梯度變化造成的，在紫外低波長(zhǎng)檢測(cè)的條件下會(huì)更容易出現(xiàn)，這種鬼峰比較固定；一般磷酸鹽體系更容易出現(xiàn)鬼峰，建議添加鬼峰捕集小柱去除。

2. 儀器中管路有氣泡也會(huì)容易產(chǎn)生鬼峰，但這種鬼峰一般保留時(shí)間不固定，在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，首先對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行脫氣處理，同時(shí)更換流動(dòng)相后，對(duì)儀器管線進(jìn)行Purge。

樣品的降解變質(zhì)，以及樣品本身可能帶有的，但因樣品批次問(wèn)題可能不固定出現(xiàn)；需要進(jìn)一步的排查。

流動(dòng)相、儀器系統(tǒng)（包括手動(dòng)進(jìn)樣的進(jìn)樣針）、色譜柱或樣品污染帶來(lái)的，需要沖洗液相色譜系統(tǒng)。

殘留在柱子上，前一陣洗脫不全導(dǎo)致在下一針出峰，從而導(dǎo)致鬼峰，建議更換洗針液。

在線過(guò)濾器內(nèi)的濾芯是具有一定孔徑的篩板，死體積更小，只能過(guò)濾掉一些大于篩板孔徑的雜質(zhì)。清洗的時(shí)候，只要取下篩板超聲即可。

保護(hù)柱的卡套中放置的是保護(hù)柱芯，柱芯內(nèi)有填料，相較于在線過(guò)濾器，死體積更大。保護(hù)柱芯不僅能過(guò)濾固體雜質(zhì)，還能吸附一些強(qiáng)極性、強(qiáng)酸性或者強(qiáng)堿性的物質(zhì)，防止色譜柱內(nèi)填料的污染，可以對(duì)色譜柱進(jìn)行保護(hù)。

通常液相色譜柱的柱頭也有不同類型，常見(jiàn)的有HSS型以及W型，大的差別在于連接所用的接頭管線伸出來(lái)長(zhǎng)度有差異，HSS型為2.4mm,W型則為3.3mm。當(dāng)使用一些不銹鋼接頭的時(shí)候，接頭卡死導(dǎo)致伸出長(zhǎng)度固定，難以匹配不同類型色譜柱。

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